BIO-RAD CFX Maestro
BIO-RAD CFX Maestro安裝教程
BIO-RAD CFX Maestro是一個(gè)化繁為簡(jiǎn)的BIO-RAD定量PCR數(shù)據(jù)處理大師，軟件能夠操作所有CFX系列實(shí)時(shí)定量PCR儀，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)置、儀器操作和數(shù)據(jù)分析，軟件全面整合了數(shù)據(jù)采集、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（t- 檢驗(yàn)、方差分析）和用于出版發(fā)表的結(jié)果導(dǎo)出功能，為實(shí)時(shí)定量 PCR 儀實(shí)驗(yàn)提供了一站式的解決方案。
軟件應(yīng)用
背景簡(jiǎn)介：
肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis，ALS），俗稱“漸凍人”，是一種運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病，病人表現(xiàn)出因上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性所致的肌無(wú)力、肌萎縮等癥狀。為研究其是否存在細(xì)胞自噬的病理，研究者將ALS患者和其他非ALS類型包括包涵體肌炎（inclusion body myositis，IBM，一種慢性炎癥性肌?。颖镜冗M(jìn)行比較。觀察ALS病理的一種已知標(biāo)志物磷酸化TAR DNA結(jié)合蛋白43（pTDP-43）以及調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬的P62蛋白的特異性表達(dá)情況。除用到免疫組化、免疫熒光的方法外，研究人員也對(duì)這兩種蛋白對(duì)應(yīng)的基因TARDBP 和SQSTM1 進(jìn)行了qPCR實(shí)驗(yàn)分析比較，以下是具體的過程。
樣本設(shè)置：
ALS樣本組——ALS1-ALS5共5個(gè)生物學(xué)重復(fù)；
IBM樣本組——IBM1-IBM3共3個(gè)生物學(xué)重復(fù)；
陰性對(duì)照組——MSC1-MSC3共3個(gè)輕微神經(jīng)源性肌萎縮樣本生物學(xué)重復(fù)；
空白對(duì)照——1個(gè)無(wú)模板對(duì)照
基因設(shè)置：
2個(gè)目的基因——TARDBP，SQSTM1；
2個(gè)參考基因——GAPDH，RPS18；
所用到的染料法引物對(duì)均來(lái)自于Bio-Rad提供的PrimePCR Assay。
板面布局：
12個(gè)樣本×4個(gè)基因，1個(gè)96孔板做2個(gè)重復(fù)，共做2個(gè)96孔板（即2個(gè)批次實(shí)驗(yàn)，各4個(gè)技術(shù)學(xué)重復(fù)）。
數(shù)據(jù)分析方法：
將TARDBP 和SQSTM1 表達(dá)用兩個(gè)參考基因（GAPDH，RPS18）進(jìn)行均一化，兩組患者分別與對(duì)照組進(jìn)行相對(duì)均一化基因表達(dá)比較，顯著性檢驗(yàn)采用非配對(duì)t 檢驗(yàn)。
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